La vitamina C, también conocida como ácido ascórbico, es un potente antioxidante que no es exclusivo de frutos cítricos, como las naranjas o los limones. Como bien nos ha contado nuestro investigador, los futos de los pimientos son muy ricos en este producto, tato que bastan unas decenas de gramos de pimiento crudo para satisfacer nuestras necesidades diarias de vitamina C. Por ello y por la variación que pueda presentar el contenido de ácido ascórbico en los frutos maduros en función de los tratamientos es por lo que se hace necesario estudiar su contenido en esta sustancia.
Para valorar la cantidad de vitamina C que hay en una muestra debemos utilizar una reacción específica que nos permita cuantificarla. El almidón es un polisacárido que reacciona específicamente con el lugol, un compuesto que tiene iodo. Si a una solución de almidón le añadimos unas gotas de lugol, se tornará violeta oscuro. La vitamina C previene frente a esta reacción, por lo que si añadimos a la solución de almidón vitamina C, no aparecerá el color morado mientras ésta no se consuma en esa reacción. Cuánto más ácido ascórbico contenga la solución con almidón, más lugol tendremos que añadir para conseguir que aparezca el color morado en el tubo de ensayo.
A partir de la cantidad utilizada de lugol podremos estimar la concentración de vitamina C. En su momento preparamos una curva patrón con soluciones de ácido ascórbico de concentración conocida; medimos la cantidad necesaria de lugol para que apareciese color y los resultados se muestran en la gráfica de abajo.
Esta curva nos permite predecir qué cantidad de lugol necesitaremos para que nos dé positiva la reacción ante una cantidad de vitamina C conocida. Pero alternativamente, y esto es lo importante, conociendo la cantidad de lugol añadido, sabremos que cantidad de ácido ascórbico tendremos en una muestra, ya que la reacción se rige por las leyes de la proporcionalidad, como se dijo antes. Un sencillo procedimiento matemático nos permite, además, obtener una ecuación (la ecuación de la recta de regresión que vemos en la figura) que nos permite relacionar ambos valores. Basta con sustituir en la fórmula el volumen de lugol empleado. En nuestro caso la ecuación se expresa de la siguiente forma:
Volumen de lugol en microlitros = 95,479 · cantidad de vitamina C (en un mililitro)
Para calcular la cantidad de vitamina C que tenemos en las muestras, despejamos esa incógnita según la expresión
Cantidad de vitamina C = 95,479 / volumen de lugol
En nuestro experimento del viernes, partimos de seis gramos de muestra de pimiento que trituramos en tampón. A partir del extracto, valoramos la concentración de vitamina C en 0,5 ml de extracto de pimiento. Esto es importante para averiguar la concentración final en el pimiento. Los resultados de las medidas que realizamos el viernes han sido los siguientes:
A partir de aquí toca hacer los cálculos de la concentración de vitamina C en cada uno de los tubos aplicando la ecuación anterior. Considerad que la cantidad que hemos calculado era el contenido de vitamina C en 0,5 mL de extracto de pimiento y que hemos puesto 1 mL de tampón por cada gramo de pimiento. Es simplemente un problema de concentraciones, como los que tenéis que saber hacer en Química. Por favor, anotad vuestros resultados en los comentarios. Y a modo de despedida, unas fotos del viernes.
A partir de lo que hemos estudiado en los datos, parece que a medida que aumenta la concentración de vitamina C en la muestra, se requiere un mayor volumen de lugol para lograr la coloración. Esto concuerda con lo que se muestra en la gráfica, que revela una relación casi proporcional entre las dos variables, lo cual señala que el método empleado es bastante confiable para calcular la cantidad de vitamina C. Asimismo, algunas muestras muestran más variabilidad en las mediciones, como la de capsaicina. Esto podría ser por errores en los experimentos o porque existe una variabilidad más alta en la reacción. En términos generales, los hallazgos indican que el experimento posibilita una comparación aproximada del contenido vitamínico C entre diferentes muestras.
ResponderEliminarPara la determinación de vitamina C usando Lugol, se han obtenido resultados diferentes, si bien puede ser porque las propiedades químicas de los pimientos se hayan visto afectadas producto de los distintos tratamientos, no hay que descartar, desde mi punto de vista, la posibilidad de haber cometido un pequeño error al introducir el Lugol en la disolución. Con esto me refiero a no colocar la pipeta completamente paralela a las paredes del tubo de ensayo y que parte del lugol quedase por tanto adherido a estas. Puede parecer que esta pequeña diferencia no debería de suponer un problema para las determinaciones, pero al trabajar con cantidades tan pequeñas de lugol, por pequeña que sea la cantidad de este que se adhiera a las paredes puede suponer un porcentaje significativo en relación al lugol que se está introduciendo en la disolución. Simplemente quería dejar esto por escrito por si hubiese que considerarlo en algún momento.
ResponderEliminarAlberto, hay algo importante en lo que dices. Y es el tener en cuenta todas las consideraciones posibles a la hora de hacer un experimento, especialmente las causas que puedan dar lugar a variaciones en los resultados o incluso errores. Efectivamente, el no depositar el lugar adecuadamente o el no pipetear adecuadamente, bien tomando más o bien menos, nos hará cometer errores. Por eso es importante hacer varias determinaciones, comparar estos resultados y calcular el error cuando hacemos la media. Y haces bien en decirlo, porque si ves en la entrada más reciente del blog, hay algunas discrepancias en los valores de vitamina C que habrá que considerar.
EliminarBuenas apreciaciones sobre el volumen de lugol empleado en las valoraciones para los distintos tipos de pimientos. Pero lo que en realidad necesitamos es la valoración de la cantidad de vitamina C que tienen esos pimientos. Y para eso hay que aplicar las fórmulas que ofrecemos en la entrada. Eso nos permite comparar con la bibliografía o con los resultados que obtuvimos en proyectos anteriores. Es muy fácil, tan solo aplicar la fórmula que tenéis en la entrada.
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ResponderEliminarDurante esta sesión, hemos determinado la cantidad de vitamina C en diferentes muestras a partir del lugo utilizado. Cuanto mayor concentración de vitamina C, mayor volumen del lugol se necesita .
ResponderEliminarPara calcular la cantidad de vitamina C presente en cada pimiento, usamos la fórmula : Vitamina C = volumen de lugol ÷ 95.479
Los resultados obtenidos ( en 0.5 mL de extracto ) son:
Agua : VItamina C = 333/95.479 = 3,48 mg en 0,5 g de pimientos
GSNO: 370 / 95.479= 3,87
NAHS: 360 / 95.479= 3,77
Etanol: 345 ÷ 95.947= 3.61
Melatonina: 233 ÷ 95.479= 2,44
Capsaicina: 293 ÷ 95.479= 3,06
Estos valores corresponden a 0,5 mL de extracto que equivalen a 0,5 g de pimiento. Para obtener la cantidad por gramo, multiplicamos por 2( porque es el doble):
H2O: 3,48 × 2 = 6.96 mg/g
GSNO: 3,87×2 = 7.74 mg/g
NAHS: 3,77× 2= 7,54 mg/g
Etanol: 3.61× 2 = 7.22 mg/g
Melatonina: 2,44 ×2 = 4,88 mg/g
Capsaicina: 3,06×2 = 6.12 mg/g
Podemos observar que la vitamina C varía según el tratamiento aplicado. La muestra con mayor cantidad de vitamina C es la tratada con GSNO ya que contiene 7,74 mg en 1 g de pimiento, mientras que la menor corresponde a la melatonina ( 4.88 mg en 1 g de pimiento).
Muy bien Safae. Has hecho los cálculos correctamente. Y muy bien la corrección que has hecho ya que utilizábamos 0,5 ml de extracto en lugar de 1 ml. Y efectivamente, los pimientos con menor cantidad de vitamina C, son los tratados con melatonina. Este dato nos llamó la atención e hicimos algunas valoraciones más para asegurar los resultados. Estos se muestran en la entrada más reciente del blog.
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